enn Medicine 研究人員在Science Advances在線發(fā)表的新概念驗證研究中報告說，一種新的 CRISPR 基因編輯技術(shù)預(yù)防了已知由數(shù)百種不同突變驅(qū)動的遺傳性肝病，并改善了小鼠的臨床癥狀。研究結(jié)果表明，一種很有前途的 CRISPR 工具可能會治療因酶、鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)氨酶 (OTC) 缺乏而導(dǎo)致的罕見代謝性尿素循環(huán)障礙患者，以及由同一基因上的不同突變引發(fā)的其他遺傳性疾病。
CRISPR 方法建立在 Penn Medicine 之前開發(fā)的一種方法的基礎(chǔ)上，該方法僅限于糾正一個突變——它有益于新生小鼠而不是成年小鼠。這一次，這項技術(shù)——采用一種新型的雙腺相關(guān)病毒 (AAV) 來傳遞其成分——在基因組中插入了一個“小基因”，以實現(xiàn) OTC 在肝細胞中的持續(xù)表達，這被稱為“剪切”和“粘貼”的方法。沒有糾正任何突變，而是將一組新的指令添加到細胞中。結(jié)果，研究人員觀察到新生小鼠的臨床益處持續(xù)到成年期。
“就像大多數(shù)對新生兒有致命影響的遺傳疾病一樣，長期有效的早期治療是必不可少的，”醫(yī)學(xué)教授、基因治療項目主任、醫(yī)學(xué)博士 James Wilson 說。賓夕法尼亞孤兒疾病中心。“在這里，我們將 CRISPR 方法向前推進，不僅可以維持細胞中 OTC 的表達，還可以擴大該工具的能力。我們的目標(biāo)是最終將這種基因編輯方法從動物身上轉(zhuǎn)化為治療患有 OTC 疾病和其他遺傳疾病的患者通過分散在整個基因中的突變——而不是單一的、主要的突變。”
在每 40,000 名新生兒中就有一人發(fā)現(xiàn) OTC 疾病可能源于 OTC 基因上的 300 多種不同突變。由于這些突變發(fā)生在 X 染色體上，因此通常在男性中發(fā)現(xiàn)，而女性是攜帶者。尿素循環(huán)是一系列六種肝酶，可幫助清除體內(nèi)的氨。當(dāng)其中一種酶缺失或不足時，氨會在血液中積聚并進入大腦，從而導(dǎo)致腦損傷甚至死亡。為了治療這種疾病，患者服用藥物來刺激替代的氮清除途徑，或者在嚴(yán)重的情況下進行肝移植。然而，這些患者的死亡率仍然很高，因此需要更新、更有效的療法。
為了開發(fā)一種廣泛適用的基因組編輯工具，該團隊構(gòu)建了一個新的雙 AAV 載體，其中包含一種稱為 Cas9 的 RNA 引導(dǎo)細菌蛋白——一種在細胞中尋找和操縱基因的快速可靠的方法。被稱為 AAV8 的這種賓夕法尼亞大學(xué)開發(fā)的載體特別對肝細胞具有親和力。第二個 AAV 包含一個功能齊全的“小基因”，表達密碼子優(yōu)化的人類 OTC(供體 DNA)，由肝臟特異性啟動子驅(qū)動，以確保它在注入血液時僅在肝細胞中表達。
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