高效液相色譜儀操作步驟（高效液相色譜儀）

關(guān)于高效液相色譜儀操作步驟，高效液相色譜儀這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道，今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、轉(zhuǎn)載：《分析測(cè)試百科網(wǎng)》高效液相色譜儀（Agilent 1100型）操作規(guī)程 不知道樓主要什么型號(hào)的液相色譜使用方法？ 一、 開(kāi)機(jī) 開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備：流動(dòng)相使用前必須過(guò)0.45um的濾膜（有機(jī)相的流動(dòng)相必須為色譜純；水相必須用新鮮注射用水，不能使用超過(guò)3天的注射用水，以防止長(zhǎng)菌或長(zhǎng)藻類(lèi)）； 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。

2、A瓶：為水相 B瓶：為有機(jī)相。

3、 2、打開(kāi)電腦，選Win 2000，進(jìn)入Win 2000界面。

4、 3、雙擊CAG Boodp server圖標(biāo)，放大CAG Boodp server小圖標(biāo)，出現(xiàn)窗口，5min內(nèi)打開(kāi)液相各部件電源開(kāi)關(guān)，等待1100廣播信息后，表示通訊成功連接，關(guān)閉CAG Boodp serve窗口。

5、 4、雙擊online圖標(biāo)，儀器自檢，進(jìn)入工作站。

6、 該頁(yè)面主要由以下幾部分組成： ——最上方為命令欄，依次為File，Run Control，Instrumen…等； ——命令欄下方為快捷操作圖標(biāo)，如多個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)行分析、單個(gè)樣品進(jìn)樣分析、調(diào)用文件保存文件……等； ——中部為工作站各部件的工作流程示意圖；依次為進(jìn)樣器-輸液泵-柱溫箱-檢測(cè)器-數(shù)據(jù)處理-報(bào)告； ——中下部為動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)信號(hào)； ——右下部為色譜工作參數(shù)：進(jìn)樣體積、流速、分析停止時(shí)間、流動(dòng)相比例、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等。

7、 4、從“View”菜單中選擇“Method and control”畫(huà)面。

8、 二、 編輯參數(shù)及方法 開(kāi)始編輯完整方法： 從“Method”菜單中選擇“New method”，出現(xiàn)DEF-LC.M，從“Method”菜單中選擇“Edit entire method”，選擇方法信息、儀器參數(shù)及收集參數(shù)、數(shù)據(jù)分析參數(shù)和運(yùn)行時(shí)間表等各項(xiàng)，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

9、 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

10、單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

11、 3、泵參數(shù)設(shè)定： 進(jìn)入“Setup pump”畫(huà)面，在“Flow” 處輸入流量，如1ml/min；在“Solvent B”處輸入有機(jī)相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，編輯梯度；輸入保留時(shí)間；在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。

12、單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

13、 4、DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定： 進(jìn)入“DAD signals”畫(huà)面，輸入樣品波長(zhǎng)及其帶寬、參比波長(zhǎng)及其帶寬（參比波長(zhǎng)帶寬默認(rèn)值為100nm）； 選擇Stoptime：as Pupm； 在“Spectrum”中輸入采集光譜方式“store”：選All；如只進(jìn)行正常檢測(cè)，則可選None； 范圍Range：可選范圍為190~950nm； 步長(zhǎng)Step可選2.0nm； 閥值： 選擇需要的燈； Peak width（Response time）即響應(yīng)值應(yīng)盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬，可選“2s”或4s； Slit-：狹窄縫，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。

14、可選4nm 單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

15、 5、進(jìn)入“Signal Details”畫(huà)面，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

16、 6、進(jìn)入“Edit Integration Events”（編輯積分結(jié)果）畫(huà)面，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

17、 7、進(jìn)入“Specify report”（積分參數(shù)）畫(huà)面，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

18、 8、進(jìn)入“Instrument curves”畫(huà)面，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。

19、 9、進(jìn)入“Run Time checklist”（運(yùn)行時(shí)間表）畫(huà)面，選擇“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”，單擊OK，完成參數(shù)設(shè)定，回到工作站畫(huà)面。

20、 10、單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入文件名，單擊OK。

21、（路徑：eHPCHEM1methods***） 注：如果調(diào)用一個(gè)方法，則在“Method”菜單，選中“Load method”，選方法名，單擊OK。

22、 1從菜單“View”中選擇“Online signal”，選中Window 1 ，然后單擊Change鈕，將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中，點(diǎn)OK。

23、（如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào)，則重復(fù)11，選中Window 2）。

24、 三、運(yùn)行樣品 單擊泵（Pump）圖標(biāo)下面的小瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積，并且選停泵體積。

25、單擊OK。

26、 2、手動(dòng)打開(kāi)Purge閥：逆時(shí)針轉(zhuǎn)2~3圈。

27、 3、單擊泵（Pump）圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。

28、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。

29、 4、開(kāi)泵：直接點(diǎn)Pump圖標(biāo)下面的泵開(kāi)關(guān)小圖標(biāo)，或單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump contrlo選項(xiàng)，選中On，單擊OK。

30、 5、系統(tǒng)開(kāi)始排液（Purge），直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，切換通道繼續(xù)排液，直到所有通道無(wú)氣泡為止。

31、（每個(gè)管線內(nèi)液體約20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完） 6、單擊泵（Pump）圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。

32、把Flow改為0.5~1.0ml/min，單擊OK。

33、 7、等待流速降下來(lái)后，關(guān)閉排液閥。

34、 8、待壓力穩(wěn)定后，從“Instrument”菜單中選擇“System on”或單擊GUI圖標(biāo)的On圖標(biāo)啟動(dòng)系統(tǒng)。

35、開(kāi)始走基線，并可選擇觀察信號(hào)。

36、 注：儀器運(yùn)行過(guò)程，畫(huà)面顏色由灰色轉(zhuǎn)變成黃色或綠色，當(dāng)各部件都達(dá)到所設(shè)參數(shù)時(shí)，畫(huà)面均變?yōu)榫G色，左上角紅色的“not ready”變?yōu)榫G色“ready”，表明可以進(jìn)行分析。

37、（此時(shí)如果要終止儀器的運(yùn)行，可單擊流程圖右下角的“off”，再單擊“Yes”，關(guān)閉輸液泵和檢測(cè)器氘燈）。

38、 9、單擊最大化按鈕，將online Plot窗口放大。

39、待基線平穩(wěn)后，點(diǎn)信號(hào)窗口的“Banlance”，調(diào)至零點(diǎn)。

40、 10、等儀器Ready ，從“Runcontrol”菜單中選擇F5或“Run method”。

41、 1編輯樣品信息： 從“Run control”菜單中選擇“Sample into”選項(xiàng)，選擇“Sample Info…..”，即打開(kāi)了樣品信息頁(yè)面，輸入操作者（Operator Name）、數(shù)據(jù)存貯通道（Subdirectory）、樣品名（Sample Name）、進(jìn)樣瓶號(hào)（Vial）、濃縮因子（Multipline）、稀釋因子（Dilution）、，“Data file”中選擇 “Prefix”，在Prefix框中輸入批號(hào)或日期等，在Counter框中輸入計(jì)算器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名。

42、（樣品量（Sample Amount）、內(nèi)標(biāo)量（ISID Amount）可不選，Location只對(duì)自動(dòng)進(jìn)樣器有用，不填則走空白，檢查干擾峰的來(lái)源。

43、） 單擊OK。

44、 12、進(jìn)樣分析： 進(jìn)樣閥扳到Load位置，插入注射器，注樣品，進(jìn)樣后扳動(dòng)閥至Inject位置。

45、 13、進(jìn)樣分析結(jié)束，點(diǎn)Close鍵退出樣品分析。

46、 （注意：檢測(cè)完盡量要關(guān)DAD的燈，以保持燈的壽命。

47、單擊DAD圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊control ，選擇關(guān)燈。

48、） 四、數(shù)據(jù)分析方法編輯（可在offline下操作） 從“View” 菜單中選“Date analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫(huà)面。

49、該頁(yè)面最上方為命令欄，依次為File ，Graphics，Integration……等。

50、命令欄下為快捷操作圖標(biāo)，如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調(diào)用、多色譜圖調(diào)用、調(diào)用方法、保存等。

51、 2、 從“File”菜單中選“Load signal”，或單擊快捷操作的“單一色譜圖調(diào)用”圖標(biāo)，選擇色譜圖文件名，單擊“OK”，畫(huà)面中即出現(xiàn)所調(diào)用的色譜圖。

52、 3、 做圖譜優(yōu)化，從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)。

53、從Ranges中選擇Auao scale及合適的顯示時(shí)間，單擊OK，或選擇“Use Ranges”調(diào)整。

54、反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。

55、 4、 積分 （1）先調(diào)用所要分析的色譜圖，從“Integration”中選擇“Auto integrate”，從“Integration”中選擇“Integration Results”，此時(shí)儀器將內(nèi)置的積分參數(shù)給出積分結(jié)果。

56、如積分結(jié)果不理想，再?gòu)摹癐ntegration”菜單中選擇“Integration Events”選項(xiàng)，或單擊快捷操作的“編輯/設(shè)定積分表”圖標(biāo)，此時(shí)，在屏幕下方左側(cè)出現(xiàn)積分參數(shù)表，右側(cè)為積分結(jié)果，在積分參數(shù)表中按實(shí)際的要求輸入修改的參數(shù)，如斜率（Slope sensitivity）、峰寬（Peak width）、最小峰面積（Area reject）、最低峰高（Height reject）等。

57、 （2）從“Integration”中選擇“Integrate”選項(xiàng)或單擊快捷操作的“對(duì)現(xiàn)有色譜圖積分”圖標(biāo)，儀器即按照新設(shè)定的積分參數(shù)重新積分。

58、 （3）若積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿(mǎn)意為止。

59、 （4）完成后，單擊左邊的“ˇ”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。

60、 5、 打印報(bào)告： （1）從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng)，或單擊最右側(cè)快捷操作的“定義報(bào)告及打印格式”（右下角帶叉的報(bào)告畫(huà)面）圖標(biāo)，進(jìn)入打印畫(huà)面。

61、 （2）根據(jù)實(shí)際要求選擇報(bào)告的格式和輸出形式等。

62、可在“Calculate”右則的黑三角中選“Percent”（面積百分比），其它項(xiàng)不變。

63、（如 “Destination”項(xiàng)下選擇“Screen”； “Based On”選“Area”；“Sorted By”選“Signal”；“Repirt Style”選“Short”；選擇“Add chromatogram Output（打印色譜圖）”；選擇“With Calibrated Peaks”；選擇“Portrait”；可根據(jù)需要選擇“Size”）。

64、 （3）單擊OK。

65、 （4）選擇快捷操作的“報(bào)告預(yù)覽”圖標(biāo)，可預(yù)覽報(bào)告的全貌。

66、從“Report”菜單中，選擇“Print Report”，則報(bào)告打印到屏幕上，如想輸出到打字機(jī)上，則單擊“Print”，即可進(jìn)行報(bào)告的打印。

67、最后，單擊“close”退出此操作頁(yè)面。

68、 6、 定量分析 如果需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制備，可按此項(xiàng)進(jìn)行操作。

69、 （1）一級(jí)校正表的建立： 在“Data Analysis”界面下，調(diào)用最低濃度的色譜圖，在“欄“Calibration”下，選擇“New Calibration Table”，選擇“Automatic Setup Level”，并設(shè)校正級(jí)數(shù)為 “1”，單擊“OK”。

70、在畫(huà)下方左側(cè)出現(xiàn)校正表，右側(cè)為校正圖。

71、在畫(huà)面左下側(cè)的校正表中選擇所要的色譜峰，輸入校正級(jí)數(shù)、化學(xué)物名稱(chēng)及濃度，如果采用內(nèi)標(biāo)法，需對(duì)內(nèi)標(biāo)峰進(jìn)行標(biāo)記。

72、單擊OK，工作站提示是否刪除0濃度行，單擊Yes 。

73、 （2）二級(jí)校正表的建立： 調(diào)用第二個(gè)色譜圖，在命令欄“Calibration”下，選擇“Add Level”，設(shè)為“2”，單擊“OK”，在畫(huà)面左下側(cè)的校正表中輸入校正級(jí)數(shù)、化學(xué)物名稱(chēng)及樣品濃度。

74、（如需對(duì)校正表中的某些數(shù)據(jù)進(jìn)行重新修正，可調(diào)用新的圖譜，在命令欄“Calibration”下，選擇“Recalibration”，并在校正表中輸入校正級(jí)數(shù)，樣品濃度。

75、）此時(shí)，校正表右側(cè)自動(dòng)繪制各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸。

76、單擊校正表中的“Print”，可進(jìn)行打印。

77、 五、關(guān)機(jī) 關(guān)機(jī)前，用過(guò)緩沖鹽溶液必須先用100%的水沖洗系統(tǒng)（打開(kāi)排液閥，調(diào)流速為5ml/min，沖洗約5 min，然后調(diào)流速為1ml/min，待流速降下來(lái)后，關(guān)閉排液閥，再?zèng)_洗沖洗約20 min）；然后用甲醇同法清洗20min，然后關(guān)泵。

78、 注意：此方法適用于反相色譜柱，而正相色譜柱應(yīng)用適當(dāng)?shù)娜軇_洗。

79、 2、清洗進(jìn)樣器： 將進(jìn)樣器扳至Load的位置，用專(zhuān)用的注射器裝約10ml適當(dāng)溶劑沖洗進(jìn)樣器。

80、 當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)扳動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。

81、 3、退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shut down）。

82、 4、關(guān)掉Agilent 1100電源開(kāi)關(guān)。

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