導(dǎo)讀 關(guān)于克隆基因用什么技術(shù),基因克隆技術(shù)包括哪些這個問題很多朋友還不知道,今天小六來為大家解答以上的問題,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧!1、
關(guān)于克隆基因用什么技術(shù),基因克隆技術(shù)包括哪些這個問題很多朋友還不知道,今天小六來為大家解答以上的問題,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧!
1、基因克隆的方法主要有哪幾種選擇目的基因,并設(shè)計相應(yīng)引物;用引物PCR擴增目的基因片段;選擇合適(抗性標(biāo)記、酶切位點等)的克隆載體(為了保真擴增),并將PCR片段連接入克隆載體中;(一般用Taq酶的PCR產(chǎn)物在末尾會自帶一個A,可在Solution 1作用下與兩端各帶一個T的線性T載體直接相連)將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養(yǎng)基上生長擴增;從大腸桿菌中提取質(zhì)粒(即前面的連接產(chǎn)物),酶切鑒定和測序鑒定均無誤后將目的基因片段切下并與新的表達(dá)載體連接,然后再次轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中擴增,再提質(zhì)粒,即得到想要的目的基因片段克隆.。
本文分享完畢,希望對大家有所幫助。
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