關(guān)于酵母雙雜交原理及試驗(yàn)方法,酵母雙雜交原理這個(gè)問題很多朋友還不知道,今天小六來為大家解答以上的問題,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧!
1、酵母雙雜交法的原理:典型的真核生物轉(zhuǎn)錄因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcription-activating domain)。
2、前者可識別DNA上的特異序列, 并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游, 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用, 啟動(dòng)它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。
3、擴(kuò)展資料:酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用, 具有高度敏感性。
4、主要是由于:采用高拷貝和強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體使雜合蛋白過量表達(dá)。
5、2、信號測定是在自然平衡濃度條件下進(jìn)行, 而如免疫共沉淀等物理方法為達(dá)到此條件需進(jìn)行多次洗滌,降低了信號強(qiáng)度。
6、3、雜交蛋白間穩(wěn)定度可被激活結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物而增強(qiáng), 后者又與啟動(dòng)子DNA結(jié)合, 此三元復(fù)合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。
7、4、通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。
8、同時(shí), 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表達(dá)等檢測方法均很敏感。
9、在研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能特點(diǎn)、作用方式過程中,有時(shí)還要通過突變、加抑制劑等手段破壞蛋白質(zhì)間的相互作用。
10、針對實(shí)際工作中的這種需要,Vidal等人發(fā)展了所謂的逆雙雜交系統(tǒng)(reverse two-hybrid system)。
11、這項(xiàng)技術(shù)的關(guān)鍵是報(bào)道基因URA3的引入。
12、URA3基因在這里起到了反選擇的作用,它編碼的酶是尿嘧啶合成的關(guān)鍵酶。
13、參考資料來源:百度百科——酵母雙雜交。
本文分享完畢,希望對大家有所幫助。
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