臺盼藍染色劑屬于活體染色劑嗎（臺盼藍染色活細胞）

關(guān)于臺盼藍染色劑屬于活體染色劑嗎，臺盼藍染色活細胞這個問題很多朋友還不知道，今天小六來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、一. 臺盼藍配制：4％臺盼藍母液：稱取4克臺盼藍，加入少量蒸餾水研磨，加0.9%NaCl至100毫升，用濾紙過濾，4℃保存。

2、或者直接用0.9%的生理鹽水或者PBS配成母液 用的時候用生理鹽水或者PBS稀釋 。

3、臺盼藍染色步驟：1.、4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。

4、使用時。

5、用PBS稀釋至0.4%。

6、（也可買Gibco的成品）; T 　　2、胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，并作適當稀釋。

7、 　3、染色：細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。

8、（終濃度0.04%） 　　4、計數(shù)：在三分鐘內(nèi)，分別計數(shù)活細胞和死細胞。

9、 　　5、鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。

10、 　　6、統(tǒng)計細胞活力：活細胞率（%）= 活細胞總數(shù)/（活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù)）×100%二. 結(jié)晶紫配制： 結(jié)晶紫 2.0g 草酸銨 0.8g 95％酒精 20ml 餾水 80ml 先將結(jié)晶紫溶于酒精，草酸銨溶于蒸餾水中，然后將兩液混合，靜置48小時使用。

11、此染液穩(wěn)定，置密閉的棕色瓶中可儲存數(shù)月。

12、結(jié)晶紫染色步驟： 1．在96孔細胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時，讓細胞帖壁。

13、 　　2．用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標準品，根據(jù)需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標準品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復(fù)孔。

14、對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養(yǎng)液。

15、繼續(xù)培養(yǎng)18～24小時。

16、 　　3．甩去培養(yǎng)液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定細胞30秒鐘。

17、 　　4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結(jié)晶紫染液，室溫中放置20分鐘。

18、 　　5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。

19、自然干燥或37℃烘干。

20、此板可以在室溫中長期保存。

21、 　　6．測定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脫色，充分振蕩后在570nm處測定光吸收度。

22、用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標準品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性。

本文分享完畢，希望對大家有所幫助。

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